apteka prima zabrze

Rodzicielską linię komórkową (CHO-DUKX) hodowano także w pożywce Alfa z 10% dFCS z dodatkiem ((3) a-adenozyny (Sigma-Aldrich, Steinheim, Niemcy) i 2 (3-deoksyadenozyny i tymidyny (Sigma Chemical Co.). Te linie komórkowe zostały hojnie dostarczone przez RT Camphausen (Genetics Institute, Cambridge, Massachusetts, USA). Przeciwciała i immunofluorescencyjne barwienie limfocytów B. Blokowanie anty-ludzkiej E-selektyny mAb (H18 / 7) (32), anty-P-selektyny (HDPG 2/3) (17) i anty-PSGL-1 (KPL-1) (21) zastosowano jako oczyszczone IgG. Poliklonalne, oczyszczone przez powinowactwo przeciwciała z króliczych surowic odpornościowych 89060 hodowanych przeciwko ESL / IgG (. ESL-1) lub kontrolnym przeciwciałom uzyskanym z tej samej oczyszczonej surowicy na ludzkiej IgG1 opisano w innym miejscu (27). Blokujące przeciwciało przeciwko mysiej selektynie E (UZ4) lub przeciwciało kontrolne rozpoznające region Fc ludzkiej IgGl (28AG10) opisano w innym miejscu (33, 34). MAb. Anty-CD5 i anty-CD10 otrzymano z Becton Dickinson Immunocytometry Systems (San Jose, California, USA). MAb HC1 / (anty-xx), TS1 / 11 (anty-A L), HP2 / (anty-A 4), TS1 / 18 (anty-a2), TS2 / 16 (anty-a 1) SAM-1 (anty-A5), 16BDH (anty-CD38), HP2 / 9 (anty-CD44) i BU38 (anty-CD23) opisano wcześniej (29, 35). Następujące mAb zostały dostarczone przez różnych badaczy: anty-VCAM-1 (4B9) (36) (JM Harlan, University of Washington, Seattle, Washington, USA); anti-CD19 (BU12) (GD Johnson, University of Birmingham, Birmingham, Wielka Brytania); anti-CLA (HECA-452) (6) (EC Butcher, Stanford University, Palo Alto, California, USA); anti-sLex (CSLEX) (PI Terasaki, University of California. Los Angeles, Los Angeles, Kalifornia, USA) (37); SNH3, FH6, 2H5 i 2F3 (R. Kannagi, Aichi Cancer Center, Nagoya, Japonia) (38, 39); anty-PSGL-1 (PSL 275) (31) (RT Camphausen); i L-selektyny (LAM 1/3) (40) (TF Tedder, Duke University, Durham, North Carolina, USA). Przeciwciało anty-HLA klasy I (W6 / 32) zastosowano jako kontrolę wiązania, bez blokady, a mysiego P3X63 zastosowano jako niezobowiązującą kontrolę negatywną. Ekspresję powierzchni cząsteczek adhezyjnych badano za pomocą analiz cytometrii przepływowej, jak opisano wcześniej (29, 41). W skrócie, komórki uprzednio traktowane ludzką (3 -globuliną inkubowano z pierwotnym mAb w temperaturze 4 ° C przez 15 minut, i użyto koziego anty-mysiego F (ab.) 2 skoniugowanego z FITC (DAKO A / S, Glostrup, Dania). jako wtórne mAb. Fluorescencję 2000 komórek zmierzono na FACScan (systemy immunocytometryczne Becton Dickinson), a dane przedstawiono jako średnią intensywność fluorescencji i liczbę komórek. W przypadku dwukolorowej analizy immunofluorescencyjnej jako wtórne mAb użyto kozie anty-mysi F (ab.) 2 skoniugowany z fikoerytryną (DAKO A / S). Anty-IgD-FITC otrzymano z PharMingen (San Diego, Kalifornia, USA). Mierzono fluorescencję 6000 komórek. Średnie intensywności fluorescencji FL-1 i FL-2 są przedstawione jako wykresy konturowe. Następujące odczynniki zostały użyte do testów immunoprecypitacji. Opisano białko fuzyjne E-selektyna / IgG (42). Białko to zawiera 4 NH2-końcowe domeny mysiej E-selektyny (lektyny, EGF i pierwszych 2 domen wiązania dopełniacza) połączonej z częścią Fc (domeny zawiasowe, C1 i C2) ludzkiej IgG1. Naczyniowe białko fuzyjne śródbłonka-kadheryny (VE-kadheryna) / IgG opisano gdzie indziej (43). Królicze anty-ESL-1 antyserum 89060 hodowano przeciwko białku fuzyjnemu ESL / IgG i oczyszczono metodą powinowactwa jak opisano (27). Przeciwciało królicze anty-PSGL-1 703 zostało skierowane przeciw peptydowi końca COOH ludzkiego PSGL-1 (44). MAb H130 przeciwko ludzkiemu CD45 otrzymano z PharMingen (San Diego, Kalifornia, USA), a mAb 68 przeciwko Hsp90, które reagują krzyżowo z mysim Hsp90 uzyskano z Transduction Laboratories (Lexington, Kentucky, USA). Testy adhezji limfocytów
[przypisy: lunchbox allegro, zielony jęczmień zastosowanie, barszcz zwyczajny a sosnowskiego różnice ]