euromedic olsztyn rezonans

Żadne z tych przeciwciał nie miało działania hamującego na zwijanie komórek B (Figura 7), co wskazuje, że oddziaływanie komórek B z selektyną E nie jest mediowane przez którekolwiek z wcześniej opisanych ligandów selektyny E o wysokim powinowactwie. Figura 7ESL-1, PSGL-1 i L-selektyna nie pośredniczą w zwijaniu komórek B w CHO-E. Komórki B traktowano przez 20 minut w temperaturze 4 ° C 10 .g / ml kontroli anty-HLA klasa I (W6 / 32) i anty-IgG, lub z blokującą anty-PSGL-1 (KPL1), L-selektyną ( LAM 1/3) lub poliklonalne anty-ESL-1 (89060). Następnie komórki perfundowano przez monowarstwy CHO-E przy dyn / cm2 i obliczono liczbę komórek tocznych. Średnia arytmetyczna. Pokazano liczbę SEM komórek tocznych obliczoną z 3 niezależnych eksperymentów. Aby zbadać charakterystykę biochemiczną liganda (ów) E-selektyny wyrażaną przez komórki migdałkowe B, przeprowadzono leczenie różnymi enzymami wpływającymi na sialilowanie lub glikozylację cząsteczek powierzchni komórki. Leczenie neuraminidazą całkowicie zablokowało walcowanie na CHO-E, pokazując absolutną zależność od kwasu sialowego w tej interakcji (Figura 8). OSGE, proteaza, która działa specyficznie na białka podobne do O-sialomuciny, nie wpływa na zwijanie komórek B (Figura 8), podczas gdy całkowicie blokuje toczenie się HL60 na CHO-P (dane nie pokazane). Wyniki te sugerują, że glikany zawierające kwas sialowy są odpowiedzialne za interakcję limfocytów B z E-selektyną. Rycina 8 Terapia limonami aminami komórek B znacznie zmniejsza zwijanie się monowarstw CHO-E. Komórki B traktowano przez godzinę w 37 ° C z lub bez 40 .g / ml OSGE lub 0,1 U / ml neuraminidazy, a następnie płukano i perfundowano przez monowarstwy CHO-E. Liczbę ruchomych komórek określono w sposób opisany wcześniej. Wartości reprezentują średnią arytmetyczną. SEM liczba toczących się komórek obliczona z 3 niezależnych eksperymentów. E-selektyna / IgG swoiście wiąże pojedynczą glikoproteinę 240 kDa z limfocytów B. Rozpuszczalne rekombinowane białka fuzyjne selektyna / IgG zastosowano do identyfikacji ligandów selektyny o wysokim powinowactwie, takich jak PSGL-1 lub ESL-1, w testach precypitacji powinowactwa (16, 17, 26, 27). W celu scharakteryzowania ligandu dla E-selektyny na limfocytach B, powierzchniowe biotynylowane lizaty otrzymane z całkowitej populacji migdałkowych komórek B wytrącono za pomocą białka fuzyjnego podobnego do przeciwciała, E-selektyny / IgG. To chimeryczne białko, ale nie ludzkie IgG, wytrąciło pasmo w przybliżeniu 240 kDa w warunkach redukujących (Figura 9a). Przeciwciała przeciwko ESL-1 wytrąciły prążek 150 kDa, który nie był strącany przez chimerę E-selektyny, co wskazuje, że ESL-1 jest obecny na powierzchni komórek B, ale nie jest zdolny do wiązania E-selektyny. Immunoprecypitacja z wykorzystaniem przeciwciał poliklonalnych przeciwko PSGL-1 potwierdziła brak obecności na powierzchni komórek B. Jako kontrola selektywnego znakowania powierzchni biotyną, przeciwciało przeciw Hsp90 nie było zdolne do wytrącenia tego wewnątrzkomórkowego białka z lizatów znakowanych powierzchniowo (Figura 9a), podczas gdy rozpoznało Hsp90 z metabolicznie wewnątrzkomórkowych wyznakowanych komórek 32dcl3 (Figura 9b). Zatem na powierzchni komórek B obecne było białko wiążące ESL-1 i E-selektynę o wielkości 240 kDa. Pasmo 240 kDa zostało całkowicie usunięte z matrycy E-selektyny / IgG przez przemycie kulek w obecności 3 mM EDTA (Figura 10a). Ponadto białko fuzyjne VE-kadheryna / IgG nie było w stanie wytrącić pasma 240 kDa (Figura 10b). Zależne od Ca2 + wiązanie białka 240 kDa z E-selektyną i brak wiązania ludzkiej IgG lub kadheryny VE / IgG sugerują, że część selektynowa w białku fuzyjnym E-selektyna / IgG jest odpowiedzialna za wiązanie z białkiem fuzyjnym. białko kDa. Ponadto, preinkubacja białka fuzyjnego z blokującym adhezję komórkową przeciwciałem UZ4 przeciw mysiej selektynie E, ale nie przeciwciałem kontrolnym, częściowo hamowała wytrącanie ligandu o masie 240 kDa (figura 10d).
[przypisy: zielony jęczmień gdzie kupić, ziarnica złośliwa i chłoniaki nieziarnicze, gaz rozweselający allegro ]