kamica żółciowa a trzustka

Ten mononuklearny preparat komórkowy zawierał 60-70% makrofagów i 20-30% limfocytów, przy czym mniej niż 10% komórek to neutrofile i komórki nabłonka. Komórki ponownie zawieszono w pożywce RPMI-1640 i wysiano na 24-studzienkowe płytki z gęstością 106 komórek na studzienkę. Po 2 godzinach inkubacji w 37 ° C, makrofagi wzbogacono przez usunięcie nieprzylegających komórek przez trzy rygorystyczne przemywania ciepłym PBS. Adherentne makrofagi hodowano w 0,5 ml RPMI-1640 z lub bez 8 .g / ml PPD lub 1,6 .g / ml LPS przez 72 godz. W 37 ° C. Supernatanty zebrano i przechowywano w temperaturze ~ 20 ° C do pomiaru cytokin. Izolacja i hodowla in vitro makrofagów płucnych od naiwnej IL-12 P /. myszy. Procedura płukania oskrzelowo-pęcherzykowego została przeprowadzona w celu wyizolowania makrofagów płucnych z naiwnej nieinfekowanej IL-12 p / p. myszy jak opisano poprzednio (7). Mysie płuco płukano łącznie 2,6 ml PBS w sześciu porcjach (0,3 ml x 2 i 0,5 ml x 4) przez rurkę polietylenową (Becton Dickinson Microbiology Systems, Sparks, Maryland, USA) wprowadzoną kaniulą do tchawicy myszy. Około 0,6 .l x 106 komórek na mysz było konsekwentnie otrzymywanych, a ponad 98% tych komórek stanowiły makrofagi. Komórki te ponownie zawieszono w pożywce hodowlanej RPMI-1640 i hodowano w 96-studzienkowych płytkach przy gęstości 0,1 x 106 komórek / studzienkę z lub bez różnych bodźców, w tym 50 CFU / komórkę żywego BCG lub unieczynnionego termicznie BCG, 1,6 | jg. / ml LPS, 8 .g / ml PPD, 400 .g / ml albuminy jaja kurzego (OVA) lub połączenie BCG lub LPS plus IL-12- lub supernatanty zawierające IFN-a w całkowitej objętości 0,25 ml dla 72 godziny w 37 ° C. W niektórych eksperymentach makrofagi hodowano w obecności przeciwciała neutralizującego IL-18, oprócz powyższych bodźców. Supernatanty zebrano i przechowywano w temperaturze ~ 20 ° C do pomiaru cytokin. Pomiary cytokin. Poziom cytokin w supernatantach hodowli określono przy użyciu zestawów ELISA specyficznych dla myszy. Zestawy ELISA IL-12 zakupiono od BioSource International (Camarillo, California, USA.) IFN-y. i TNF-a Zestawy ELISA zakupiono od R & D Systems Inc. Czułość wykrywania wszystkich tych zestawów ELISA była mniejsza niż 5 pg / ml. Ocena aktywacji makrofagów przez immunobarwienie i analizę FACS. Zarówno C57BL / 6, jak i IL-12a /. myszy zakażono BCG przez 27 dni. Całkowite jednojądrzaste komórki płuc izolowano za pomocą protokołu enzymatycznej dyspersji, jak opisano powyżej. Około 5 x 105 komórek inkubowano z przeciwciałem anty-FcR 2.4G2 na lodzie przez 15 minut, a następnie znakowano biotynylowanym przeciwciałem M5 anty-MHC klasy II na lodzie przez 30 minut. Po przemyciu PBS / 0,2% BSA, komórki znakowano skoniugowanym z fikoerytryną przeciwciałem anty-mysim Mac przez 30 min na lodzie. Dane zostały zebrane przez FACScan (Becton Dickinson Immunocytometry Systems, San Jose, California, USA). Analizę przeprowadzono przez bramkowanie na bogatym w makrofagi obszarze z wyłączeniem limfocytów i martwych komórek. WYNIKI WYNIKÓW IL-12 dla uwalniania IFN-y, ale nie TNF-a, przez makrofagi podczas płucnego zakażenia prątkami. Niedawno wykazano w modelu płucnego zakażenia prątkami BCG w dzikim typie i IL-12. /. myszy, że IL-12 jest niezbędna do uwolnienia cytokin typu IFN-y i TNF-a w płucach (7, 8). W nieobecności IL-12 limfocyty T z płuc nie uwolniły IFN-y. w odpowiedzi na prowokację wywołaną przez prątek antygenu in vitro (7). W wyniku takiego braku odpowiedzi na cytokiny typu stwierdzono osłabioną odpowiedź ziarniniakową w płucach i stały wzrost liczby prątków zarówno w płucach, jak i śledzionie w okresie 71 dni, w przeciwieństwie do skutecznej kontroli. infekcji w ich immunokompetentnych odpowiednikach (7, 8). Jednak rola IL-12 w aktywacji makrofagów i odpowiedziach cytokin podczas infekcji mykobakteriami płucnymi pozostaje do ustalenia
[podobne: serwatka z mleka owczego, guzkowe zapalenie tętnic, ziarnica złośliwa i chłoniaki nieziarnicze ]