klinika zeza w krakowie

W związku z tym zbadaliśmy ekspresję FucT, a także czynników determinujących węglowodany w limfocytach B. Przeanalizowaliśmy obecność różnych (a1,3) -FucT związanych z glikozylacją ligandów E-selektyny. Ekspresję transkryptów mRNA dla FucT-VII, FucT-IV i C2GnT mierzono za pomocą półilościowego RT-PCR w całkowitym RNA wyizolowanym z próbek komórek B i porównano z danymi uzyskanymi przy użyciu komórek HL60 jako kontroli pozytywnej. Stwierdzono, że komórki B endogennie wyrażają FucT-VII, FucT-IV i C2GnT (Figura 5a). W celu określenia, czy te enzymy ulegały ekspresji selektywnej w przylegającej populacji, komórki B frakcjonowano do komórek CD44 + i CD38 +, a subpopulacje ponownie analizowano za pomocą półilościowego RT-PCR stosując 2-krotne seryjne rozcieńczenia wejściowego cDNA dla dokładniejszej oceny względnych różnic w ekspresji mRNA. Jak pokazano na Figurze 5b, przylegająca populacja (CD44 +) komórek B eksprymowała co najmniej 32-krotnie więcej mRNA FucT-VII niż nieprzylegające komórki GC (CD38 +), podczas gdy poziomy FucT-IV i C2GnT przedstawiono na poziomie łatwo wykrywalnym zarówno w B, -podstawy komórkowe. Wyniki te silnie sugerują udział FucT-VII w glikozylacji ligandu selektyny E na komórkach B. Figura 5 Ekspresja mRNA glikozylotransferazy w ludzkich limfocytach migdałkowych B. Ekspresję FucT-VII, FucT-IV i C2GnT w oczyszczonych migdałkowatych komórkach B przeprowadzono jak opisano w Metodach. pgk1 jest enzymem uspokajającym włączonym jako kontrola wewnętrzna. HL60, ludzka linia komórek mieloidalnych, została włączona jako kontrola pozytywna. (a) Obecność lub brak RT w reakcji jest wskazany przez a +. lub odpowiednio .. C odpowiada kontrolnym komórkom HL60, a B odpowiada próbkom komórek B z całej populacji. (b) Limfocyty B frakcjonowano do komórek CD38 + i CD44 + i analizowano za pomocą półilościowego RT-PCR, stosując 2-krotne seryjne rozcieńczenia idące od lewej do prawej. Ostatnia linia w każdym zestawie jest kontrolą ujemną braku RT (. RT). Poprzednie badania cytometrii przepływowej wykazały, że limfocyty migdałka B nie wykazują ekspresji CLA, sLex, Lex lub Lea. Komórki B również nie wykazują ekspresji CD57, CDw65 CD35, CD66 i sulfatydów (29). Rozszerzyliśmy tę analizę, określając ekspresję innych dodatkowych determinantów węglowodanowych na komórkach migdałowatych B. Epitop rozpoznawany przez mAb 2H5, ale nie SNH3 i FH6, wykryto w tych komórkach (Figura 6). HECA452 mAb, CSLEX i 2F3 rozpoznają sLex lub warianty tej struktury, które są epitopy zależne od FucT-VII (6, 37, 39, 45) i sugerowano, że wiążą się bezpośrednio z E-selektyną. Stwierdzono, że epitopy te nie ulegają ekspresji w limfocytach B spoczynkowych (Figura 6). Opisano ligandy E-selektyny o wysokim powinowactwie, takie jak PSGL-1, ESL-1 lub L-selektyna (16. 28). Ekspresję PSGL-1 analizowano przy użyciu 2 swoistych mAbs, PSL 275 i KPL-1, przy czym ta druga specyficznie rozpoznaje siarczanowaną domenę końcową NH2 tej cząsteczki (21). Ani mAb anty-PSGL-1 nie rozpoznały limfocytów B (Figura 6). Selektyna L była słabo wyrażana, chociaż poziom ekspresji był wyższy w przylegającej populacji (tabela 1). Figura 6Powierzchniowa ekspresja determinantów węglowodanowych na limfocytach B. Całkowite próbki komórek B łatwo oczyszczone z migdałków analizowano za pomocą FACS, jak opisano w Methods. Histogramy przedstawiające ekspresję CD19 (Bu12) na powierzchni komórki, różne epitopy węglowodanowe (SNH3, FH6, 2F3, 2H5, HECA452 i CSLEX), PSGL-1 (KPL-1 i PSL 275), jak również nie wiążące przeciwciało kontrolne (X63) są pokazane. Na toczenie się limfocytów B na monowarstwy CHO-E nie miało wpływu leczenie przeciwciałami blokującymi adhezję przeciwko PSGL-1 lub selektynie L (Figura 7). Zbadano również wpływ blokowania poliklonalnego przeciwciała anty-ESL-1, stosując oczyszczone przez powinowactwo przeciwciała poliklonalne.
[podobne: zespol retta, zielony jęczmień zastosowanie, ziemia okrzemkowa allegro ]