laryngolog frampol

Rzeczywiście, zmiany w Ca2 +, zarówno na poziomie globalnym, jak i wewnątrz wybranych mikrośrodowisk, mogą aktywować kinazę zależną od Ca2 + / kalmoduliny w sercu i prowadzić do dalszych zmian w postępowaniu z Ca2 +, które mogą indukować apoptozę miocytów i niewydolność serca (61. 64). Jednak zasadniczo nie istnieją żadne dane mechaniczne, które wskazują na nekrotyczny proces utraty komórki jako istotny czynnik przyczyniający się do niewydolności serca, chociaż wykazano dane korelacyjne. Martwica występuje w większości tkanek po urazie niedokrwiennym lub przeciążeniu Ca2 + w połączeniu z wyczerpywaniem się wysokoenergetycznych fosforanów, takich jak ATP, powodując obrzęk i pęknięcie mitochondrium (22. 24). Martwica związana z obrzękiem i pęknięciem mitochondriów nie jest uważana za ściśle pasywny, ale może być regulowana na poziomie porów MPT poprzez aktywność cyklofiliny D (23-25). Zakłócenie Ppif znacząco odczulało komórki i tkanki do nekrotycznej śmierci komórki po niedotlenieniu, przeciążeniu Ca2 + i stymulacji ROS w sercu i mózgu (26-28). W istocie kardiomiopatię indukowaną doksorubicyną, która wiąże się z wysokim poziomem ROS jako mechanizmu wywołującego chorobę, zapobiegano w Ppif. /. kiery. Ponadto zwiększony napływ Ca2 + związany z dystrofią mięśniową w Scgd . /. myszy częściowo zablokowano przez delecję Ppif (DP Millay i JD Molkentin, niepublikowane obserwacje). Istnieją również dowody na to, że ROS może być jeszcze silniejszy niż przeciążenie wapniem, powodując MPT jako zasadniczą determinantę utraty komórek nekrotycznych w dorosłych miocytach (65). Bez względu na bodziec, łączna utrata komórek przez martwicę była skorelowana z niewydolnością serca i starzeniem w wielu wcześniejszych badaniach (10, 21). Ppif. /. myszy mogą służyć jako krytyczne narzędzie do analizowania mechanistycznych związków między martwicą komórek a skłonnością do niewydolności serca w dodatkowych mysich modelach choroby. Takie dane mogą sugerować najodpowiedniejsze sposoby leczenia pewnych typów chorób serca za pomocą środków przeciwbakteryjnych, przeciwapoptotycznych lub kombinacji obu środków terapeutycznych do spowalniania lub zatrzymywania postępu ścierania komórkowego w niewydolności serca. Inhibicję cyklofiliny D można wprowadzić za pomocą CsA, który, jak wykazano, silnie blokuje MPT wiele lat temu poprzez jego interakcję z tą cyklofiliną. Jednak CsA hamuje także kalcyneurynę jako kompleks z cyklofiliną A, powodując szereg innych efektów w miocytach, z których niektóre mogą nie być pożądane. Na przykład utrata aktywności kalcyneuryny zwiększa stratę komórek apoptotycznych w sercu (66). Zatem nowsze analogi CsA, które nie hamują kalcyneuryny, mogą być korzystne dla osłabiania MPT i utraty komórek przez martwicę w wybranych postaciach niewydolności serca. Metody Generowanie transgenicznych myszy i procedur zwierzęcych. CDNA kodujący szczurzą podjednostkę LTCCa2a (35) sklonowano w zmodyfikowanym mysim wektorze ekspresyjnym promotora a-MHC, aby umożliwić ekspresję regulowaną Dox w połączeniu z transgenem ekspresjonującym tTA specyficznym dla serca (34). Myszy transgeniczne Bcl-2 opisano wcześniej (36). Myszy ukierunkowane na Ppif zostały również opisane wcześniej (26), podobnie jak Mlpc /. myszy (67). TAC przeprowadzono w sposób opisany wcześniej przez nas (45). Doksorubicynę podawano przez wstrzyknięcie ip w dawce 15 mg / kg, a myszy obserwowano przez 2 tygodnie. W celu ilościowego oznaczenia nekrotycznych miocytów wstrzyknięto 100 .g mAb przeciw miozynie sercowej (Biogenesis), a następnie 24 godziny później analizę immunohistochemiczną na zamrożonych odcinkach 7 . m skoniugowanym z przeciwciałem anty-mysim Alexa Fluor (Invitrogen). Eksperymenty z udziałem zwierząt zostały zatwierdzone przez Instytucjonalny Komitet ds. Pielęgnacji i Użytkowania Zwierząt w Szpitalu Dziecięcym w Cincinnati. Analiza Western i RT-PCR. Próbki komorowe z mysich serc zamrożono w ciekłym azocie i przechowywano w temperaturze ~ 70 ° C Do analizy Western blot próbki serca homogenizowano w buforze do ekstrakcji [100 mM (NH4) 2SO4; 20 mM Tris-HCl, pH 7,5; 10% glicerol; 1% Triton X; mM DTT; mM EDTA; mM EGTA; 10 MM inhibitor kalpainy II (Roche); i .g / ml pepstatyny] i koktajlu inhibitora proteazy (kompletny bez EDTA, Roche) i odwirowywano przy 3000 g przez 5 minut w temperaturze 4 ° C, a powstałe supernatanty zostały zapisane. Białka analizowano również metodą blottingu Western z tkanki serca przygotowanej w buforze na bazie sacharozy (250 mM sacharoza, 10 mM Tris-HCl, pH 7,5, mM DTT, mM EDTA i inhibitory proteazy, Roche). Te próbki serca homogenizowano za pomocą napędzanego silnikiem homogenizatora teflonowego w buforze do ekstrakcji sacharozy, homogenaty wirowano przy 3000 g przez 5 minut w temperaturze 4 ° C, a powstały supernatant był zapisywany i przechowywany w temperaturze. 70 ° C aż do użycia. Warunki Western blot zostały opisane wcześniej (68). Przeciwciała zawierały podjednostkę. 2a (podarunek od K. Campbell, University of Iowa Carver College of Medicine, Iowa City, USA), podjednostkę. 1c,. 2. podjednostka (Alomone Labs Ltd.),
[podobne: koński pasożyt, guzkowe zapalenie tętnic, zielony jęczmień zastosowanie ]