usg jamy brzusznej brzeg

Podobne poziomy hamowania obserwowano dla wytrącania ESL-1 z komórek 32Dcl3, przy użyciu tego samego białka fuzyjnego selektyny E (34). Figura 9 Izolacja z udziałem powinowactwa ligandów E-selektyny z ludzkich migdałkowych komórek B. Limfocyty B wyizolowano z ludzkich migdałków i powierzchni biotynylowanej, jak opisano w Metodach (a). Komórki 32Dcl3 znakowano metabolicznie [35S] metioniną / [35S] cysteiną, jak opisano w Metodach (b). Detergentowe ekstrakty z komórek poddano immunoprecypitacji z ludzką IgG jako kontrolą (ludzkie IgG), E-selektyną / IgG (E-selektyna / IgG), króliczą kontrolą IgG (co), oczyszczonymi przez powinowactwo przeciwciałami króliczymi przeciwko ESL-1 (. ESL-. 1) lub PSGL-1 (P-PSGL-1), mAb przeciwko CD45 (P CD45) lub Hsp90 (AHSP90) lub kontrolnemu mAb (co). Immunoprecypitowane antygeny izolowano za pomocą SDS-PAGE w warunkach redukujących, przenoszono na nitrocelulozę i wykrywano za pomocą streptawidyny sprzężonej z peroksydazą i ECL (a). W b, elektroforezowane antygeny oglądano za pomocą fluorografii. Markery masy cząsteczkowej (w kilodaltonach) zaznaczono po lewej stronie. Figura 10 Wiązanie liganda 240 kDa z białkiem fuzyjnym E-selektyna / IgG jest specyficzne względem E-selektyny. Wiązanie to wymaga kwasu sialowego, ale jest niezależne od N-połączonych łańcuchów bocznych węglowodanów. Limfocyty B były powierzchniowo biotynylowane, a ekstrakty detergentowe były immunoprecypitowane ludzką IgG jako kontrolą (hIgG), E-selektyna / IgG, VE-kadheryna / IgG lub oczyszczonym przez powinowactwo króliczym anty-ESL-1 (ESL-1). (a) Matrycę E-selektyny / IgG przemywano w obecności lub bez 3 mM EDTA. (c) Limfocyty B traktowano z lub bez U neuraminidazy przed biotynylowaniem powierzchni. (d) Przed inkubacją z matrycą powinowactwa E-selektyny / IgG z ekstraktami komórkowymi, matryce inkubowano z PBS (a), 400 .g kontrolnego mAb 28AG6 przeciw ludzkiej części IgG1 Fc lub 400 .g mAb. UZ4 wobec myszy E-selektyny. (e) Ligand 240 kDa wyizolowano za pomocą powinowactwa z E-selektyną / IgG i eluowano EDTA. Eluowany materiał był bezpośrednio poddawany elektroforezie (ścieżka 1) lub traktowany (ścieżki 2 i 4) lub bez (ścieżki 3 i 5) 0,5 U endoglikozydazy F przez 12 godzin w 37 ° C. Jedna trzecia traktowanych próbek była bezpośrednio poddawana elektroforezie (ścieżki 2 i 3) lub ponownie wytrącona E-selektyną / IgG (ścieżki 4 i 5). Znakowane białka poddano elektroforezie w 6% żelu poliakrylamidowym w warunkach redukujących, przeniesiono na nitrocelulozę i wykryto za pomocą streptawidyny sprzężonej z peroksydazą. Wskazano markery masy cząsteczkowej (w kilodaltonach). W d i e, strzałki wskazują ligand E-selektyny 240 kDa. W celu potwierdzenia zapotrzebowania kwasu sialowego na wiązanie ligandu 240 kDa z selektyną E, limfocyty B traktowano neuraminidazą lub bez niej i precypitowano E-selektyną / IgG lub przeciwciałem przeciwko ESL-1 (Figura 10c). . Usunięcie kwasu sialowego upośledziło oddziaływanie liganda 240 kDa z E-selektyną. W przeciwieństwie do tego, traktowanie sialidazą nie blokowało wytrącania ESL-1, które tylko nieznacznie zmniejszyło pozorną masę cząsteczkową, co pokazało, że zanikanie pasma 240 kDa było spowodowane brakiem interakcji z E-selektyną. / IgG i nie do niespecyficznej degradacji. Aby określić udział N-glikanów w wiązaniu ligandu glikoproteiny 240 kDa z E-selektyną / IgG, potraktowaliśmy ligand znakowany biotyną, który został wymyty za pomocą EDTA z matrycy powinowactwa E-selektyny / IgG z endoglikozydazą. F. To leczenie spowodowało nieznaczny, ale wyraźnie wykrywalny spadek pozornej masy cząsteczkowej ligandu glikoproteiny (Figura 10e, ścieżka 2), pokazując, że ta cząsteczka niesie połączone przez N węglowodanowe łańcuchy boczne. Podwielokrotności zarówno endoglikozydazy F, jak i pozornie traktowanych próbek ponownie wytrącono E-selektyną / IgG, co wskazuje, że wiązanie liganda 240 kDa do E-selektyny nie wymaga N-glikanów. Dyskusja Oczyszczone ludzkie migdałkowe komórki B składają się z różnych subpopulacji, z których każda wykazuje dobrze zdefiniowany fenotyp (1)
[hasła pokrewne: zespół tietza, rozpoznanie wg icd 10, guzkowe zapalenie tętnic ]